Microscopie en fluorescence

 

Certaines substances ont la propriété lorqu'elles sont éclairées par des lumières de courte longueur d'onde d'émettre une lumière de longueur d'onde plus élevée. C'est la fluorescence.
En microscopie, cette propriété est utilisée pour visualiser certaines structures. En général, les radiations ultra violettes ou bleues sont utilisées pour l'excitation et l'observation se fait dans le visible.

Certains objets sont naturellement fluorescents: on parle de fluorescence primaire ou d'autofluorescence. D'autres objets peuvent acquérir une fluorescence par imprègnation de colorants fluorescents appelés fluochromes: c'est la fluorescence secondaire.

Les pigments chlorophylliens font partie des substances autofluorescentes. Ils fournissent des observations faciles et spectaculaires en passant d'une couleur verte en lumière naturelle à une couleur rouge en fluorescence.

Exemple de fluorescence primaire: fragment d'une feuille de bryophyte, Mnium undulatum

Cellules de Mnium en éclairage standart et en fluorescence

comparaison normal/fluorescence

 

Exemple 2: coupe transversale botanique

La cellulose des parois et surtout les substances de la cuticule des végétaux sont également fluorescentes

 

coupe d'aiguille en éclairage standart et en fluorescence

comparaison fluorescence et normal

 

Cette animation montre la variation d'aspect d'un mème sujet (diatomées d'eau douce non colorées) sous 3 éclairages d'excitation différents. Après l'aspect en lumière naturelle ou le brun domine, s'affichent successivement l'aspect en fluorescence avec excitation en ultraviolet, violet et bleu. Dans les 3 cas, les pigments des diatomées sont surtout fluorescents en rouge.

 

 

Pour une description plus détaillée avec en particulier les techniques de marquages par anticorps fluorescents très utilisés actuellement en biologie, consultez cet article de la médiathèque pour enseignants SVT de Jussieu.

En anglais, je vous signale ce tutoriel.

Les fabriquants de filtres pour la fluorescence diffusent aussi des informations:
chroma et omegafilters


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Copyright de l'auteur: <Daniel Nardin> Réalisation: mardi 28 mars 2000