Techniques de contraste optique en microscopie

Les objets biologiques comme les cellules sont souvent transparents et nécessitent une coloration pour en distinguer les constituants. Diverses techniques permettent d'augmenter le contraste des images sans intervention sur la préparation et donc de permettre des observation sur le vivant. Il s'agit essentiellement du contraste de phase inventé par Zernicke en 1932 et du contraste interférentiel développé par plusieurs auteurs dont Nomarski en 1952.

Dans le contraste de phase, au moyen d'une "plaque de phase " dans l'objectif associée à un "anneau de phase" sous le condenseur, les objets incolores, peu épais (dits "de phase") sont rendus par des valeurs de gris différenciées en fonction du déphasage qu'ils introduisent. Différents type de plaques de phase existent: PositiveLow, PositiveLowLow, NegativeHigh, NegativeMedium. (cette page est liée à l'essai d'un objectif NM acheté d'occasion)

En contraste interférentiel, un système optique dédouble le faisceau avant la traversée de l'objet puis un système symétrique recompose les deux faisceaux en les faisant interférer.

Voici des images de spermatozoïdes réalisées avec ces deux techniques pour vous permettre d'en comparer le rendu.

Contraste de phase positif: (un objet plus réfringent que le milieu donne une image sombre sur fond gris. C'est le contraste de phase standart) bonne mise en valeur des flagelles, halo autour des cellules

Contraste de phase négatif: (un objet plus réfringent que le milieu apparait en blanc sur fond gris. Je me suis procuré ce type d'objectif en occasion et il correspond à un modèle plus ancien que mon microscope. Je ne sais pas pour l'instant si la moindre qualité vient de cela ou d'une mauvaise mise au point) lisibilité moins bonne sur ce sujet de toute façon.

Contraste interférentiel: images sans halo, avec une impression de relief Cette technique est vraiment supérieure mais le matériel en est beaucoup plus couteux.

	Le contraste interférentiel permet d'exploiter les objectifs les plus forts. (100x) Il est possible également de colorer le fond avec une couleur d'interférence (ici bleu)
Une autre technique , plus simple à mettre en oeuvre pour les objectifs faibles du moins, est celle du "fond noir" . Elle consiste à éclairer latéralement l'objet qui apparait grace à la lumière qu'il diffuse. Il y a un fort contraste et les images sont spectaculaires mais il y a moins de détails.

Faites moi part de vos réactions.... Daniel Nardin

Dernière mise à jour: vendredi 12 janvier 2001